鉬釩酸顯色液的使用由什么是要注意的嗎

 

　　通常的鉬釩酸顯色液由多個(gè)組份組成，必須在使用前進(jìn)行配制，并且容易產(chǎn)生沉淀，使用相對(duì)不太方便，并且也容易導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果不太穩(wěn)定。本鉬釩酸顯色液采用了新的TMB顯色技術(shù)，把所有的相關(guān)試劑全部配制在一個(gè)溶液中，僅由單一溶液組成，簡(jiǎn)化了操作步驟，并且使檢測(cè)結(jié)果更加穩(wěn)定可靠。

 

　　使用之前，以超純水反復(fù)洗滌的適當(dāng)容器，倒出適量單組分鉬釩酸顯色液，待溶液達(dá)到室溫即可使用。加液：加完HRP結(jié)合物并溫育一定時(shí)間后，洗板3－5次，每孔加TMB底物100－150uL，37°C溫育15－30分鐘。 

 

　　終止（備選）：加等體積的1N的HCl或者2N的H2SO4來終止反應(yīng)。酶標(biāo)孔中反應(yīng)液從藍(lán)色變?yōu)辄S色。讀數(shù)：終止反應(yīng)后，30分鐘內(nèi)在450nm處讀數(shù)。不加終止液，顯色更加穩(wěn)定，可以在620－650nm處讀數(shù)。 

 

　　注意： 

 

　　降低底物強(qiáng)度：如果出現(xiàn)高的反應(yīng)背景和/或沉淀，表明鉬釩酸顯色液反應(yīng)過于強(qiáng)烈。為了避免產(chǎn)生沉淀，可以在加入終止液后馬上讀數(shù)；另外，可以進(jìn)一步稀釋一抗和/或HRP結(jié)合物。為了降低非特異性背景顏色，空白進(jìn)一步降低一抗和/或HRP結(jié)合物的濃度，盡量避免降低底物濃度。